緩沖液準(zhǔn)備

　　1．沖洗緩沖液（0.1M磷酸鈉，pH7.2）。要避免緩沖液中含NaCl。配好的緩沖液放置于4℃保存。

　　2．洗脫緩沖液（0.1M磷酸鈉，0.1M氟化鈉，pH7.2）。使用注射器時(shí)，洗脫緩沖液需保存在4℃。

　　3．清洗緩沖液（0.1M磷酸）。

　　4．保存緩沖液（0.02%疊n化鈉，0.1M磷酸鈉，pH7.2）。

　　蛋白層析柱的上樣和沖洗

　　1．從柱子端部拿掉塞子，保存好這些塞子，備用。

　　2．用10倍柱體積沖洗緩沖液平衡柱子。因?yàn)楸４婢彌_液中含有0.02%的疊n化鈉用來抑菌，為了去除疊n化物對離子的激發(fā)作用，這步預(yù)平衡是必須的。使針筒充滿沖洗緩沖液，插入柱子并把所有緩沖液推入柱子。

　　3．預(yù)冷（4℃）的細(xì)胞裂解液上柱。使針筒充滿裂解液，插入柱子并把所有裂解液推入柱子。對于1ml柱子，可以上5ml的裂解液。

　　4．用15倍柱體積沖洗緩沖液沖洗柱子。使沖洗緩沖液充滿針筒，插入柱子并把所有的緩沖液推入柱子。這步可以根據(jù)純化蛋白的需要增加額外的沖洗步驟。

　　洗脫

　　1．使針筒充滿6倍柱體積的洗脫緩沖液，先把1.5倍柱體積的洗脫緩沖液上柱。收集1.5倍柱體積的流出液，每部分0.5倍柱體積，對其進(jìn)行分析。在第二部分收集液中通常會(huì)含有一些純化的蛋白。針筒也可以留在柱子上，用塞子塞住出口。

　　2．在室溫下，用洗脫緩沖液孵育柱子至少30分鐘。如果在4℃下孵育，則至少孵育12小時(shí)。

　　3倍柱體積洗脫緩沖液上柱。通常大量的蛋白會(huì)在前面五部分洗脫緩沖液中被洗脫出來。

　　清洗

　　1．用至少5倍柱體積的沖洗緩沖液沖洗柱子。

　　2．用3倍柱體積的清洗緩沖液清洗柱子。

　　3．用5倍柱體積沖洗緩沖液平衡柱子。

　　4．用2倍柱體積保存緩沖液平衡柱子；蓋好柱子并保存于4℃。

　　以上便是今天關(guān)于蛋白層析柱使用操作快速指南主要包括四個(gè)部分的全部分享了，希望對大家今后使用本設(shè)備能有幫助。